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Diagnostic de laboratoire : Peste porcine africaine

Quelles méthodes de diagnostic de laboratoire puis-je utiliser pour diagnostiquer la peste porcine africaine ? Laquelle dois-je choisir en fonction de la situation ? Comment interpréter les résultats ?

Tests disponibles

Le graphique ci-dessous montre les changements de concentration (axe Y) au cours du temps (axe X) des différents analytes utilisés dans les tests. Après l'exposition, la virémie débutera en 1 ou 2 jours et durera 3-4 semaines. La séroconversion (détection d'anticorps) se produit généralement dans les 14 jours suivant l'exposition et dure plusieurs mois ou années.

Figure 1. Schéma de détection du virus et des anticorps, ainsi que de la variabilité de la virulence de la souche après exposition à la PPA. Source : Laboratoire de référence de l'Union européenne pour la PPA.

Polymerase Chain rReaction (PCR)

Détecte la présence de séquences spécifiques d'acide nucléique viral (ADN).
Types d'échantillons : sérum, sang ou tissus.
Avantages :
- Méthode la plus sensible et préférée de détection de l'agent.
- Coût modéré :
  - Les échantillons peuvent souvent être regroupés pour réduire les coûts et minimiser la perte de sensibilité.
Inconvénients :
- Nécessite des amorces appropriées (amorces).

Hémadsorption (HAT)

Détecte la présence de virus par la liaison des érythrocytes à la membrane externe (cytoplasmique) des macrophages porcins infectés par le virus de la PPA.
Types d'échantillons : sérum ou plasma.
Avantages :
- L'un des tests de référence standard.
Inconvénients :
Certaines souches de terrain n'induisent pas d'hémadsorption et les résultats négatifs nécessitent souvent une confirmation par PCR.

Dosage par immunoabsorption enzymatique des antigènes (Ag- ELISA)

Détecte la présence de l'agent.
Types d'échantillons : généralement du sang et éventuellement d'autres tissus spécifiques (suivre les recommandations du kit).
Avantages :
- Kits commerciaux disponibles.
- Relativement bon marché.
Inconvénients :
- Beaucoup moins de sensibilité que la PCR.
- Le regroupement des échantillons n'est pas recommandé.
- Les résultats négatifs nécessitent généralement une confirmation par PCR.

Dosage par immunoabsorption enzymatique des anticorps (Ab ELISA)

Rechercherla présence d'anticorps.
Types d'échantillons : sérum ou plasma.
Avantages :
Les animaux restent positifs pendant plusieurs mois ou années.
Peut être utilisé dans les cas chroniques.
Peut être utilisé dans les cas de faible virulence / subcliniques.
La séroconversion survient généralement en 7 à 10 jours.
Il n'existe actuellement aucun vaccin commercial disponible qui puisse perturber l'interprétation des résultats.
Inconvénients :
Il faut 7 à 10 jours pour que les animaux deviennent séropositifs.
Ne fait pas de distinction entre les anticorps maternels et l'exposition.

Immuno-fluorescence indirecte (IFA)

Recherche la présence d'anticorps.
Types d'échantillons : sérum ou plasma.
Avantages :
- Test de confirmation sur des échantillons ELISA positifs de manière inattendue.
Inconvénients :
- Nécessite que les animaux aient été infectés pendant au moins 1 semaine.
- N'est pas faisable pour un grand nombre d'échantillons.
- Les résultats dépendent de la souche virale utilisée dans le test.
- La fiabilité dépend fortement de la compétence des techniciens.

Figure 2. Diagramme démontrant l'utilisation de l'IFA comme test de confirmation pour les échantillons qui sont de manière inattendue positifs pour la PPA par ELISA. Un échantillon présumé négatif qui donne un résultat ELISA négatif est considéré comme négatif. Si cet échantillon donne de manière inattendue un résultat positif, un test IFA peut être effectué comme test de confirmation. Autrement dit, si le test IFA est positif, l'échantillon est confirmé comme étant positif. Si le test IFA est négatif, on supposera qu'il s'agit d'un faux positif tant que la PCR est également négative pour confirmer qu'il n'y a pas d'infection récente.

Immunoperoxydase indirecte (IPT)

Recherche la présence d'anticorps.
Types d'échantillons : sérum ou plasma.
Avantages :
- Test de confirmation sur des échantillons ELISA positifs de manière inattendue.
Inconvénients :
- Nécessite que les animaux aient été infectés pendant au moins 1 semaine.
- N'est pas faisable pour un grand nombre d'échantillons.
- Les résultats dépendent de la souche virale utilisée dans le test.
- La fiabilité dépend fortement de la compétence des techniciens.

Figure 3. Diagramme démontrant l'utilisation de l'IPT comme test de confirmation pour les échantillons qui sont inattendus positifs pour le PPA par ELISA. Un échantillon présumé négatif qui donne un résultat ELISA négatif est considéré comme négatif. Si cet échantillon donne de manière inattendue un résultat positif, un test IPT peut être effectué comme test de confirmation. C'est-à-dire que si le test IPT est positif, l'échantillon est confirmé comme étant positif. Si le test IPT est négatif, nous supposerons qu'il s'agit d'un faux positif tant que la PCR est également négative pour confirmer qu'il n'y a pas d'infection récente.

Interprétation des résultats:

Souvent, plusieurs tests sont nécessaires pour fournir une meilleure interprétation du diagnostic de PPA.

Tableau 1. Interprétation des résultats diagnostiques de la PPA. Source : Laboratoire de référence de l'Union européenne pour la peste porcine africaine.

Test	Résultat	Scénarios les plus probables
PCR	Faible (Ct>35)	L'animal a été récemment infecté et n'a pas encore séroconverti (< 7 jours). Les signes cliniques peuvent ne pas être évidents..
Ab-ELISA	Négatif
IPT	Négatif
PCR	Positif	L'animal a été récemment infecté, présente des signes cliniques et amorce une séroconversion (7-10 jours).
Ab-ELISA	Négatif
IPT	Positif
PCR	Positif	a) Infection en cours. L'animal reste virémique avec des signes cliniques et a déjà séroconverti (> 10 jours). b) Réinfection d'un animal avec des anticorps préformés provenant d'une infection précédente (porc ayant récupéré, survivant). Le titre IPT fournira des informations sur le moment de l'infection.
Ab-ELISA	Positivo
IPT	Positif
PCR	Faible (Ct>35) ou négatif	a) Infection antérieure. L'animal s'est rétabli d'une infection aiguë ou subaiguë et peut ne pas présenter de signes cliniques. b) L'animal a été infecté par une souche atténuée (avec ou sans signes cliniques). c) Réinfection d'un animal avec des anticorps préformés provenant d'une infection précédente (porc ayant récupéré, survivant). Le titre IPT fournira des informations sur le moment de l'infection.
Ab-ELISA	Positif
IPT	Positif

PCR

Positif : Le virus est présent ; infection actuelle.
Négatif : Négatif ou le virus n'est pas détecté si le test est effectué longtemps après l'infection.

HAT

Positif : Le virus est présent ; infection actuelle.
Négatif : Négatif, infection par une souche non hémadsorbante ou le virus n'est pas détecté si le test est effectué longtemps après l'infection. Le négatif doit être confirmé par PCR.

Ag-ELISA

Positif : Le virus est présent ; infection actuelle.
Négatif : Négatif, virus présent mais à de faibles concentrations ou le virus n'est pas détecté si le test est effectué longtemps après l'infection. Le négatif doit être confirmé par PCR.

Ab-ELISA

Positif : Anticorps maternels ou exposition antérieure (> 7-10 jours) au virus de terrain.
Négatif : infection virale négative ou de terrain trop récente pour être détectée.

IFA

Positif : Anticorps maternels ou exposition antérieure (> 7-10 jours) au virus de terrain.
Négatif : négatif ou infection par un virus sauvage trop récente pour être détectée.

IPT

Positif : Anticorps maternels ou exposition antérieure (> 7-10 jours) au virus de terrain.
Négatif : négatif ou infection par un virus sauvage trop récente pour être détectée.

Scénarios

Il est important de noter que certains pays peuvent exiger l'approbation de l'autorité compétente avant que tout test de PPA puisse être effectué.

Épidémie aiguë présumée de PPA chez les porcs de tout âge

Recueillir le sang de divers animaux atteints et l'analyser par PCR ; on peut envisager de regrouper les échantillons.
Recueillir les rates et les amygdales de porcs morts et les analyser par PCR ; on peut envisager de regrouper les échantillons.

Photo 1. Prélèvement en cas de suspicion de PPA. Photo reproduite avec l'aimable autorisation du Dr Nadezhda Konovalova.

Suspicion de circulation chronique de PPA chez les porcs de tout âge sans mortalité

Recueillir le sang de 30 porcs présentant des signes cliniques (prélèvement ciblé) ou sélectionnés au hasard (sans signes cliniques) et analyser par PCR (un regroupement d'échantillons peut être envisagé) et individuellement par Ab-ELISA.