Le test ELISA comme outil de diagnostic (2/2) : interprétation des résultats

Considérations sur l'interprétation des résultats :

• Les porcs exposés à un agent pathogène (de terrain ou vaccinal) mettent du temps à produire suffisamment d'anticorps pour être détectés par ELISA (généralement au moins 2 à 4 semaines après l'exposition, selon l'agent pathogène et l'anticorps recherché).
• Les tests ELISA anticorps ne peuvent pas faire la différence entre les anticorps maternels (passifs) et les anticorps dus à l'exposition (actifs).
• Les tests ELISA anticorps ne peuvent souvent pas différencier les anticorps produits par un vaccin de ceux produits par l'exposition à une souche de terrain.
• Dans certains cas, des tests ELISA spéciaux peuvent être développés, qui permettent de différencier les animaux infectés des animaux vaccinés (si des vaccins DIVA sont utilisés).
• Les résultats des tests ELISA anticorps n'impliquent pas une protection. La protection peut provenir de différents anticorps, qui ne sont pas nécessairement ceux mesurés dans le test, ou de l'immunité à médiation cellulaire, qui est complètement différente de l'immunité humorale, ou immunité à médiation par anticorps, et qui n'est pas mesurée par un test ELISA.
• Le test ELISA est nettement moins sensible (faible sensibilité analytique) pour la détection des antigènes que la PCR. La PCR réplique activement l'ADN/ARN présent, elle peut donc détecter des quantités extrêmement faibles de virus ou de bactéries. En revanche, le test ELISA antigènes nécessite une concentration nettement plus élevée de virus ou de bactéries pour pouvoir créer un changement de couleur détectable.
• Lorsque des tests ELISA commerciaux (faciles à trouver et à utiliser) sont utilisés, les résultats sont standardisés et généralement cohérents entre les laboratoires. Les tests ELISA internes peuvent produire une grande variabilité des résultats, à moins que leur protocole de production ne soit hautement standardisé et strictement suivi.
• Tous les agents pathogènes ne produisent pas une réponse immunitaire mesurable.
• En général, les différents kits ELISA analysent différentes protéines, ce qui peut donner des résultats très différents pour un même échantillon. Les grandes différences entre les kits de détection des anticorps dirigés contre Mycoplasma hyopnemoniae en sont un bon exemple ; il est clair que tous les kits ne sont pas égaux.
• La dose et/ou la voie d'exposition peuvent affecter le niveau de la réponse immunitaire (niveau de production d'anticorps).
• Il est important de connaître la sensibilité du test (capacité à détecter les vrais positifs) et sa spécificité (capacité à identifier les vrais négatifs comme des négatifs ; pas de réactivité croisée).
• Les faux positifs et les faux négatifs peuvent se produire parce que le degré d'exposition et la réponse immunitaire aux agents pathogènes varient d'un porc à l'autre (distribution normale) et qu'il existe souvent une réactivité de fond ou une réactivité croisée qui ne peut être complètement éliminée (voir figure 1).
• Les anticorps sont généralement encore présents/détectables pendant plusieurs mois après l'exposition/vaccination.

Résultats négatifs

• Échantillon/élevage effectivement négatif pour l'agent pathogène (pas d'exposition ou de vaccination).
• L'échantillon de l'élevage est vraiment négatif pour l'agent pathogène, bien que les animaux aient pu être vaccinés (si le test a la capacité DIVA) (uniquement pour le test ELISA anticorps).
• La quantité d'antigène présente dans l'échantillon est insuffisante pour permettre la détection (test ELISA antigène uniquement).
• L'échantillon a été prélevé trop tôt et le porc n'a pas encore été en mesure de générer une réponse immunitaire (ELISA anticorps uniquement).
  • Le SDRP nécessite souvent 7 à 10 jours pour la séroconversion.
  • Lawsonia intracellularis nécessite souvent 4 à 6 semaines pour une séroconversion, en fonction de la dose d'exposition.
• L'échantillon a été prélevé trop tard et l'agent pathogène n'est plus présent.
  • Le virus de la grippe n'est présent dans les sécrétions nasales que pendant les 3 ou 4 premiers jours.
• Nous recherchons le mauvais anticorps/antigène.
  • Différentes souches de grippe (différences entre H1N1 et H3N3 et également entre différents clades de H1N1)
• Faible prévalence dans l'élevage et le ou les animaux échantillonnés étaient négatifs.
  • Le nombre d'animaux échantillonnés doit être augmenté.
• Une maladie particulière peut ne pas stimuler suffisamment d'anticorps pour être détectée.
  • Mycoplasma hyopneumoniae adhère principalement aux cils des pulmonaires et ne stimule pas une production élevée d'IgG sériques.
    • Une infection récente sur le terrain produit des résultats ELISA beaucoup plus forts.
  • Les vaccins contre Mycoplasma hyopneumoniae ne stimulent pas une forte réponse immunitaire IgG
    • Les différents tests ELISA détectent différemment les vaccins
    • En général, seuls 30 % des animaux vaccinés présentent une séroconversion.
• Un échantillon faiblement positif sera dilué s'il est mélangé à d'autres échantillons.
  • Il est fortement recommandé de ne pas regrouper les échantillons !

Échantillon positif

• Échantillon/élevage effectivement positif pour l'exposition à l'agent pathogène
• Impossible de différencier si l'échantillon est infectieux ou non.
• Impossible de différencier les anticorps maternels provenant d'une exposition naturelle ou d'une vaccination.
  • La plupart des anticorps maternels disparaissent à l'âge de 8 à 12 semaines.
  • Au fur et à mesure que les porcs vieillissent, les valeurs ELISA devraient diminuer de manière significative.
  • Des tests en série peuvent être effectués pour confirmer la disparition des anticorps maternels, ainsi que l'absence d'exposition aux souches de terrain (pas de nouvelles infections).
• Selon l'agent pathogène que l'on recherche, la détection de la protéine (antigène/anticorps) ne confirme pas toujours la maladie.
  • Un sérum positif pour le circovirus porcin de type 2 (PCV2) par un test ELISA anticorps confirme l'exposition au PCV2, soit par la vaccination, soit par l'infection (les deux sont assez fréquents), mais ne confirme pas si le dépérissement est attribuable au PCV2 ou si un échec vaccinal s'est produit. Une immunohistopathologie du poumon et/ou du tissu lymphoïde doit être réalisée pour démontrer la maladie associée au PCV2.
  • Le test peut ne pas être en mesure de différencier l'exposition au virus/bactérie d'un vaccin vivant modifié ou d'une infection de terrain (ELISA anticorps uniquement).
    • Applicable à la fois aux vaccins tués et aux vaccins vivants modifiés.
    • La connaissance du moment de l'application du vaccin est utile, mais pas essentielle, car les animaux peuvent rester positifs pour certaines maladies pendant une longue période (plusieurs mois).
• Les contaminations croisées sont peu probables, car une grande quantité de contamination est nécessaire pour produire un résultat positif (cela dépend de la concentration).

• Une simple valeur ELISA peut ne pas être en mesure d'identifier complètement le stade de l'infection (l'histoire clinique est nécessaire, voir figure 2).
  • X = valeur ELISA
  • Il existe trois moments différents dans une épidémie qui peuvent produire la même valeur ELISA, mais l'interprétation et les mesures à prendre seraient très différentes :
    • Point A - Début de l'infection - l'épidémie commence ; des mesures peuvent être prises.
    • Point B - Fin de l'infection - l'épidémie est terminée ; on ne peut plus faire grand-chose.
    • Point C - Deuxième épidémie - une deuxième épidémie commence. Les mesures de biosécurité ou les causes du foyer doivent être examinées.
  • Un deuxième échantillon prélevé sur les mêmes animaux peut être nécessaire 10 jours - 2 semaines après pour déterminer le stade de l'épidémie (avec l'histoire clinique).
    • Si les résultats du deuxième test sont plus élevés, nous sommes probablement au point A.
    • Si les résultats du deuxième test sont beaucoup plus élevés, nous sommes probablement au point C.
    • Si les résultats du deuxième test ne changent pas, nous sommes probablement dans une phase de plateau.
    • Si les résultats du deuxième test diminuent, nous sommes probablement au point B.
• Des valeurs S:P élevées peuvent souvent être associées à une exposition plus récente.
  Surtout après une seconde exposition ou une vaccination de rappel (voir figure 2) (anticorps ELISA uniquement).
  • Il est important de noter que le fait qu'une infection soit récente ne signifie pas que l'agent pathogène est toujours présent (c'est-à-dire que l'animal est virémique ou bactériémique) (ELISA anticorps uniquement).
    • C'est particulièrement vrai pour le virus du syndrome dysgénésique et respiratoire porcin (SDRP).
      • Les porcs peuvent être négatifs au test ELISA et être tout de même virémiques.
      • Les porcs peuvent avoir des valeurs d'anticorps élevées dans le test ELISA et ne pas être virémiques.
      • La PCR est utilisée pour établir le niveau de virémie chez les animaux.
• Valeurs S:P basses
  • Une maladie particulièFigure 1 : Diagramme illustrant le cut-off établi pour un test ELISA. La courbe bleue représente une distribution normale des animaux négatifs. La courbe orange représente une distribution normale des animaux exposés. La zone des faux positifs et des faux négatifs est indiquée.re peut ne pas stimuler suffisamment d'anticorps pour être détectée.
  • Mycoplasma hyopneumoniae se fixe principalement sur les cils pulmonaires et ne stimule pas la production élevée d'IgG sériques.
    • Une infection récente sur le terrain produit des résultats ELISA plus forts.
  • Les vaccins contre Mycoplasma hyopneumoniae ne stimulent pas une forte réponse IgG
    • Les différents tests ELISA détectent différemment les vaccins
    • En général, seuls 30 % environ des animaux vaccinés présentent une séroconversion.
  • Les porcs traités aux antibiotiques pendant plusieurs semaines peuvent supprimer la croissance bactérienne pendant cette période, diminuant ainsi l'exposition à la maladie (mais ne l'éliminant pas), ce qui entraîne une réponse immunitaire plus faible ou moins forte à l'exposition.
    • Utiliser d'antibiotiques contre Mycoplasma hyopneumoniae au début ou au milieu du PS
    • Utiliser des antibiotiques contre les agents pathogènes entériques tels que Lawsonia intracellularis au début ou au milieu du PS.